1、顯色劑的顯色時間

顯色時間的長短對顯色有一定的影響，準(zhǔn)確掌握顯色時間是做好校準(zhǔn)曲線的重要環(huán)節(jié)。多次實(shí)驗(yàn)表明，最佳顯色時間應(yīng)為10~30 min內(nèi)，此時線性關(guān)系最好，10 min前顯色不完全，顯色45 min后，其顏色不穩(wěn)定，變化較快。應(yīng)注意的是全部樣品以測定上分光操作不超過5min為宜，這就要求每次比色管不能太多，而且動作要迅速，以達(dá)到準(zhǔn)確、高質(zhì)的測定效果。

2、顯色溫度對吸光度的影響

溫度影響納氏試劑與氨氮反應(yīng)的速度，并顯著影響溶液顏色。實(shí)驗(yàn)表明，反應(yīng)溫度為25℃時，顯色最完全;5~15℃吸光度無顯著改變，但其顯色不完全;當(dāng)溫度達(dá)30℃時，溶液褪色，吸光度出現(xiàn)明顯偏低現(xiàn)象，溶液易出現(xiàn)渾濁。因而實(shí)驗(yàn)顯色溫度應(yīng)控制在20～25℃，以保證分析結(jié)果的可靠性。

3、顯色時溶液pH值的選擇

由氨氦反應(yīng)原理可知，OH濃度影響反應(yīng)平衡。納氏試劑是強(qiáng)堿性溶液，有一定的緩沖能力，當(dāng)加入納氏試劑后，顯色的pH適宜范圍應(yīng)控制在11.8～13.4，pH低于11.8,不產(chǎn)生顏色反應(yīng)，pH高于13.4，溶液立即變渾，無法測量吸光度。